SW620/5-FU人结直肠癌细胞氟尿嘧啶耐药株

细胞介绍

SW620是从一个51岁男性白人组织中分离得到。 由A.Leibovitz等从一个淋巴结建株。细胞系主要由无绒毛的小园球细胞和双极细胞组成。它仅合成少量癌胚抗原（CEA）且在裸鼠中有高度的致瘤性。

注：本培养基是不直接添加氟尿嘧啶药物的。

细胞特性

（1）来源：结直肠腺癌，来自转移淋巴结

（2）形态：上皮细胞样  贴壁生长

（3）含量：>1×106  细胞数

（4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

（5）用途：仅供科研使用

SW620/5-FU人结直肠癌细胞氟尿嘧啶耐药株

运输和保存

干冰运输及复苏好存活细胞

（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

细胞接收后的处理

1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的*培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。      

1、细胞培养条件及相关试剂的配制

（1）培养条件： 气相：空气，100%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

（2）准备L15培养基（推荐0009）：优质胎牛血清，10%；双抗，1% ，可添加5-Fu浓度为：400~1065uM；

注意：

1. 细胞在传代和刚复苏时较为脆弱，中止液须为不含5-Fu的*培养基，且在细胞未贴壁期间和贴壁前期需用不含5-Fu的*培养基，待细胞生长状态稳定时再根据需要浓度添加5-Fu。

2.若细胞生长状态较为缓慢时，可适当降低5-Fu的浓度，或使用不含5-Fu的*培养基培养至细胞生长状态较好时，再更换为所需的5-Fu浓度。

（3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二．细胞处理：

1） 冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL*培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，*培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml*培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

注意：如还有部分细胞未消化下来，可采用分步消化：

a. 准备一个无菌的15mL离心管，加入2mL含10%FBS的*培养基；

b.将消化下来的细胞吸入①中的离心管内中和（避免吹打）；

c.向之前消化的培养瓶中加入1mL 0.25%胰蛋白酶继续消化2min左右，轻拍培养瓶，95%左右细胞脱落后加入2mL含10%FBS的*培养基中和，中和后的细胞悬液移入①中的离心管内。 

3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的*培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。